Expressão heteróloga das proteínas GDF9 e BMP15 de bovinos em sistema procarioto para imunização de fêmeas Hydrochoerus Hydrochaeris (capivara)

Resumo

A espécie bacteriana Escherichia coli foi a primeira a ser utilizada para a produção de moléculas com a tecnologia de DNA recombinante. Na atualidade várias cepas do microrganismo citado podem ser utilizadas para a fabricação de proteínas recombinantes. Exemplos de polipeptídios que podem ser fabricados com a tecnologia supracitada são GDF9 e o BMP15 que desempenham um papel crucial no desenvolvimento do folículo ovariano podendo assim atuar como método contraceptivo não invasivo em animais. Diante disso, o objetivo desta pesquisa foi expressar os genes GDF9 e BMP15 de bovinos utilizando bactérias Escherichia coli. As proteínas supracitadas com um valor de banda entre 15 e 19 KDa foram bem expressas, fato verificado com a técnica de eletroforese SDS-PAGE, porém deparou-se com o obstáculo da formação de corpos de inclusão e agregados proteicos precipitados, levando assim a adoção de novas abordagens no experimento a fim de minimizar esses problemas e manter uma alta expressão das proteínas em sua forma solúvel em meio fisiológico. Para reduzir o problema da precipitação das proteínas foram testadas 6 linhagens de E. coli com genótipo e características distintas. Embora ainda não se tenha testado a solubilidade dessas proteínas expressas, verificou-se que para as 6 cepas utilizadas a temperatura de 20°C por um período de 16 a 18h conhecido por overnight apresentava uma ótima expressão. A quantidade de indutor isopropil β-d-1-tiogalactopiranósido ideal para cada estirpe variou uma vez que não há uma estratégia universal para todos os casos de expressão. Mais experimentos precisam ser realizados a fim de elaborar o melhor protocolo para cada estirpe diante da produção de GDF9 e BMP15 contornando a problemática da expressão heteróloga e assim dando continuidade ao projeto.