Expressão heterologa das proteínas gdf9 e bmp15 de bovinos em sistema procarioto para imunização de fêmeas Hydrochoerus Hydrochaeris (capivara)

Resumo

A espécie bacteriana Escherichia coli foi a primeira a ser utilizada para a produção de moléculas com a tecnologia de DNA recombinante. Na atualidade várias cepas do microrganismo citado podem ser utilizadas para a fabricação de proteínas recombinantes. Exemplos de polipeptídios que podem ser fabricados com a tecnologia supracitada são GDF9 e o BMP15 que desempenham um papel crucial no desenvolvimento do folículo ovariano podendo assim atuar como método contraceptivo não invasivo em animais. Diante disso, o objetivo desta pesquisa foi expressar os genes GDF9 e BMP15 de bovinos utilizando bactérias E. coli. As proteínas supracitadas com um valor de banda entre 15 e 19 KDa foram bem expressas, fato verificado com a técnica de eletroforese SDS-PAGE, porém deparou-se com o obstáculo da formação de corpos de inclusão e agregados proteicos precipitados, levando assim a adoção de novas abordagens no experimento a fim de minimizar esses problemas e manter uma alta expressão das proteínas em sua forma solúvel em meio fisiológico. Para reduzir o problema da precipitação das proteínas foram testadas 6 linhagens de E. coli com genótipo e características distintas. Verificou-se que para as 6 cepas utilizadas a temperatura de 20°C por um período de 16 a 18h conhecido por overnight apresentava uma ótima expressão. A quantidade de indutor isopropil β-d-1-tiogalactopiranósido ideal para cada estirpe variou uma vez que não há uma estratégia universal para todos os casos de expressão. Acerca da solubilidade das proteínas, foi verificado que para as cepas testadas que as alterações de protocolo foram benéficas. Mais experimentos precisam ser realizados a fim de purificar as proteínas alvo contornando a problemática da expressão heteróloga e assim dando continuidade ao projeto